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内毒素的去除方法

来源:纯水设备      2020/4/5 10:26:53      点击:

苏州水处理设备

器皿中内毒素的去除:

a.干热法

适用对象:耐热物品如玻璃制品、金属制品等生产过程中所用的容器
处理方法: 180℃3~ 4h 或 250℃ 30min~ 2h
注意事项
• 1.在干烤前,被加热的玻璃器皿上最好不要有水珠,否则可能会使玻璃器皿损坏。
• 2.烘烤结束后,玻璃器皿不要马上从电热烘箱中拿出,要等温度适度降低之后才可以拿出,以免因温差太大而造成玻璃器皿损坏。
• 3.器皿上不能含有纸质或塑料制品,以免烘烤时燃烧或熔化。

b.化学降解法

适用对象:主要用于去除玻璃、塑料和其它高分子材料器皿上的内毒素。

处理方法:常用3~5%双氧水、重铬酸钾硫酸清洁液(重铬酸钾∶硫酸∶水常用配比1∶1∶10 或1∶2∶8 )、0.1M HCl或0.1 M NaOH浸泡去除。一般处理4h以上。

注意事项:佩戴防护用具,防止皮肤直接接触。

溶液中内毒素的去除

方法

原理

优点

缺点

液相分离法

一些去污剂,如Triton X-114,脱氧胆酸钠能够和内毒素的脂质部分结合,通过液相分离的方法萃取内毒素从而使后者有效地去除。

对内毒素的去除率高,且不影响有效成份的活性。该法简单高效、价格低廉、适合大规模应用,在我们日常的蛋白纯化中较为常用。

去内毒素后的样品会有微量去污剂的残留。

分子筛法

分子筛是利用凝胶的网状结构,根据分子大小进行分离的一种方法。由于蛋白质和内毒素的分子量有较大差别,因此利用分子筛可以有效去除内毒素。

去除效果明显

每次处理量小,处理时间较长。

离子交换色谱法

当溶液pH2时,内毒素带有负电荷。因此内毒素与阴离子交换介质QDEAE Sepharose Fast Flow有较强结合。柱上的内毒素可在洗脱目标蛋白后用高盐缓冲液或NaOH去除。

成本低,吸附容量大

但不适合于溶液中存在其它带负电荷物质的情况。

亲和色谱法

将适当的配基固载于色谱基质上合成出亲和介质,使它特异性结合内毒素。GenScript将多粘菌素BPMB)偶联于Sepharose FF 上,以此介质特异性吸附内毒素。

高效能、高选择性

相对成本较高。

超滤法

由于内毒素具有较大的相对分子质量,因此可选用超滤膜去除溶液中的内毒素。

操作简单,处理量大

操作过程中的压力较高。 不适合含有较大相对分子质量成份的样品。因为在除去热原的同时会阻留或吸附样品中的有效成份,使产品收率大受影响。

吸附法

活性炭用于去除内毒素是由于内毒素的相对分子质量较大。适合于组分较为简单的小分子的溶液中或水中去除内毒素。活性炭常用量为0.1%0.5%

成本低,处理量大。

活性炭的选择性较差,易吸附有效成份,纯化后溶液中的残余活性炭不易去除,且自身可能含有的重金属造成样品污染,因此目前很少使用

蒸馏法

此方法可用于生产去热源水,作为注射用水或洗涤水。

去除效果明显

成本较高

疏水层析法

内毒素的脂肪A 部份有很强的疏水性, 但在高盐下会凝集, 无法挂上疏水层析柱。因此可选择能结合目标蛋白的疏水介质去除内毒素

适用于高盐浓度的样品

目前技术不够成熟,还需要进一步探索


但是,各种去内毒素的方法不是孤立的,可以相互结合使用。 比如,如果液相分离法得到的蛋白内毒素水平未达标,可以接着利用分子筛法进一步去除内毒素。

作为目前去内毒素常用的方法,液相分离法的注意事项值得我们重视

1.液相分离方法应用于蛋白纯化中内毒素的去除

a.目的蛋白上样后,用预冷的基础溶液+1% Triton X-114缓慢淋洗柱子,直至A280数值稳定不变;
b.用预冷的去内毒素基础溶液淋洗柱子,直至A280数值达到基线,稳定不变;
c.用各梯度去内毒素的洗脱液洗脱,收集各洗脱液于去内毒素的收集管中。
d.此方法适用广泛,如我们常用Ni柱、GST柱和离子交换柱等纯化。
e.纯化过程应尽量在洁净的环境下进行,纯化时间不宜过长。
f.所用的吸管、枪头等器材应为经去内毒素处理的。

2.液相分离法应用于大量样品中内毒素的去除

a.在大量蛋白样品中加入终浓度为 1% 的Triton X-114 ,充分混匀 ,冰浴 5min ,使之成为一相 ;
b.升温超过其浊点 21 ℃,37 ℃孵育 ,观察分层情况;
c.待溶液中出现明显分层后 ,室温下 12000r/min ,离心5min ,吸取上清液 ;
d.为达到较好的去除效果,可以重复 2 次。
e.如果样品内毒素含量较高,可以提高Triton X-114浓度至2%。
f.如果升温至37 ℃后,分层不明显或比较慢,可以升温至56 ℃孵育。
g.本方法不适用于去除膜蛋白中的内毒素. 澳门网上赌彩网址大全工业纯水设备, 苏州水处理设备医用GMP纯化水设备医用水处理设备